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普通顯微鏡下EGFP原核表達,擴增質粒致細菌變綠原因




來源:責任編輯:yiyi
時間:2011-6-21 9:26:22

本來這普通顯微鏡是無法看到熒光的所以導致,顯示結果原因有:

1)并不是說發光波長在可見光范圍就是可見的。熒光是需要光激發產生的(或是可見光,或是紫外,紅外光)。
由於螢光和激勵光相比,是非常微弱的,因此螢光顯微鏡的光源強度必須很高,即使在近紫外區,
也必須有足夠的強度,為了滿足上述要求,通常採用高壓汞燈,但有時為了特殊需要,也採用氙燈或鹵素燈。(

所以普通的顯微鏡光源不夠強
,這是其一,第二就是關于光學視野, 通常螢光的強度和激勵光相比,
是極微弱的(10-3 ~ 10-5 )如果螢光和激勵光相疊加,反差就會極度地減弱,因此,必須把激勵光和螢光徹底地分離出來。再此外,熒光易衰減,
熒光顯微鏡有相應的設置減少其衰減。


2)是酵母污染所致!酵母孢子很頑固,需要整個環境通風處理。在普通的生物學實驗室,細菌、酵母等常在一起操作,甚至用不著操作酵母,環境中的野生酵母孢子就可以產生這種結果,很典型。
如果產生噬菌體污染,將出現培養液先渾濁(細菌長起來了),然后很快變成清亮的現象。如果是在劃板培養,會有噬菌斑現象。

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熒光顯微鏡使用的重要注意事項

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